揭秘P3实验室病毒检测全过程

　　中国青年报客户端广州3月10日电（中青报·中青网记者林洁）“整个实验室完全密封，与病毒‘零距离’接触，室内处于负压状态，人流、物流、气流单向流动，确保在里面的污染物不会泄漏到外面而造成污染。”今天，广东省第二人民医院P3实验室主任林剑国透露，该院每天400多份新冠肺炎核酸检测就是在P3实验室开展，实验员24小时不间断地利用分子生物学技术检测病毒。

　　核酸检测是确诊新冠肺炎的“金标准”，而检测流程中的每一个环节都是精细活儿。

　　P3实验室是生物安全防护三级实验室，根据微生物及其毒素的危害程度不同，分为四级。一级最低，四级最高。

　　其中，一级适用于对健康成年人无致病作用的微生物；二级适用于对人和环境有中等潜在危害的微生物；三级适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素；四级适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明、尚无有效疫苗或治疗方法的致病微生物或其毒素。

　　在操作中，实验员面对眼前的样本，需要“一个一个地揭开盖子，开盖加样和核酸提取”。这是与“病毒”的正面交锋。

　　林剑国介绍，实验室内的检测流程可分为5个步骤：样本进入“传递窗”——灭活处理——开盖加样和核心提取——扩增反应判断结果——高压灭菌。

　　采集的检测样本如咽拭子或肛拭子，在进入P3实验室前就得先进入一个特殊的窗口，这个传递窗有不能同时打开的双重门，保证传递样本时带进去的空气被隔离在双重门中，不污染实验室外环境。

　　样本在水浴箱经半个小时56℃高温灭活，这样会使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，在对样本进行检测时相对安全，但是病毒蛋白的基因序列并没有受到影响。

　　广东省第二人民医院检验医学部副主任技师胡亮杉介绍，在标本处理间，实验员拿到灭活后的样本时，第一个动作就是振荡，尽量让拭子上的病毒洗脱在培养基溶液中，再静置5分钟进行沉淀。

　　接下来就是开盖加样，必须人手操作，而且需要两个人高度配合才能完成，一人拧开样本罐盖子，另一人拿着微量移液器在样本罐中吸取微量溶液，放到另一个提取管里，一个样本对应一个提取管，再拧上管盖。

　　就这样，400多份样本要打开瓶盖吸取转移400多次，每一次都是实验员与病毒面对面的“开撕”。

　　“样本在开盖转移的过程中，病毒就非常容易暴露在实验室的空气中，与我们几乎就是零距离接触。”胡亮杉说，开盖加样的时候，拿着微量移液器的手往往因为戴着双重手套，而显得有些笨拙，可又不得不小心翼翼，再加上眼罩、面屏和生物安全柜玻璃窗的三重阻隔，所有动作都变缓慢，手也因为动作的缓慢劳累而不时颤抖，经常是左手扶着右手完成加样。

　　人工核酸提取的步骤更是复杂，考验的是实验员的耐心与谨慎。“核酸提取可以使用仪器辅助，但由于比对的需要，往往要人工操作，这需要反复进行离心、加试剂、洗涤等10多个步骤，其中需要打开管盖的操作就达7次以上，完成一例人工核酸提取要50分钟左右。”胡亮杉说。

　　提取的核酸送到核酸检测室内，就要上仪器了。提取的核酸加入到扩增试剂中，通过荧光PCR仪进行RT-PCR反应，先将提取的核酸逆转录成DNA，再以DNA为模版，对特定位点进行扩增，利用不同的温度进行变性、退火和延伸，每个循环采集荧光值，45个循环后绘制荧光曲线，用时约110分钟，实验员根据荧光曲线分析判断结果的阴性或阳性。

　　林剑国表示，任何一个环节出现问题都可能导致“假阴性”或“假阳性”。在检测过程中，针对可疑样本，实验员会选用不同的试剂进行复核确定；其次，每进行一批实验，均会随机插入3个以上空白对照，针对阳性样本会进行病毒基因的测序比对，以防止“假阳性”的出现。检测后，定期随机抽取检测后的样本送第三方实验室进行检测，对数据进行对比分析，同时也参加相关部门的室间质评，保障检测的准确性。

　　林剑国介绍，P3检测团队目前有21人，70%是硕士以上学历，均经过分子生物学的培训和拥有PCR上岗证。截至目前，P3实验室未出现过生物安全问题，当然也与平时训练有关。

　　“他们与战斗在病房里的医护人员不同，他们藏在实验室里，每天与病毒近距离接触，是别人看不见的‘最前线’。”林剑国说。

　　（广东省第二人民医院提供）